|
HotTaq polimeraza DNA
Polimeraza HotTaq jest specjalnie zmodyfikowaną wersją termostabilnej Taq polimerazy DNA. Enzym jest całkowicie nieaktywny w temp 20-25C a jego aktywacja następuję w temp. >55C.
Funkcje układu hot-start w tym przypadku Polimerazy HotTaq spełniają specjalnie modyfikowane oligonukleotydy. Inhibicja enzymu jest całkowicie odwracalna. Zastosowanie tego typu techniki hot-start pozwala na znaczne zwiększenie specyficzności reakcji amplifikacji, co ma szczególnie duże znaczenie w przypadku zastosowania Taq polimerazy do celów diagnostycznych.
HotTaq Polimeraza DNA jest termostabilnym enzymem o masie w przybliżeniu 94kDa. Enzym uzyskuje maksymalną aktywność się w temp. 70-74C (może również pracować w stosunkowo niskich temperaturach tzn. od 25C), czas półtrwania w temp. 94C wynosi w przybliżeniu 45 min.
Enzym prowadzi syntezę DNA w kierunku 5′ - ->3′ w obecności jonów Mg 2+ i przy odpowiednim stężeniu dNTPs. Produkt otrzymany z wykorzystaniem HotTaq Polimerazy DNA, posiada na obu końcach nieznaczną ilość dodatkowo włączonej zasady (A). Pozwala to na efektywne klonowanie bez dodatkowych etapów reakcji.
HotTaq Polimeraza DNA posiada aktywność egzonukleazy 5′- ->3′ przejawiającą się wyłącznie podczas pracy na dsDNA. Obecność aktywności 5′ - ->3′ czyni ten enzym bardzo efektywnym w reakcjach amplifikacji DNA z sondami molekularnymi.
|
DNA Polymerases
Taq 5'-3' exo. Polymerases
